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A. Une protéine cytotoxique est purifiée
à partir de corps parasporaux de
Bacillus
thuringiensis A1100
et après maturation par
protéolyse ménagée à la protéinase K.
La piste 2 de l'analyse SDS-PAGE ci-dessus montre la
pureté de la préparation et permet d'évaluer la masse
moléculaire de la protéine : vers 30 kDa.
Piste 1 = marqueur de taille
.
.
A
Adapté de Ekino K, Okumura S, Ishikawa T, et al. Cloning and characterization of a unique cytotoxic protein parasporin-5 produced by
Bacillus thuringiensis A1100 strain.
Toxins (Basel). 2014;6(6):1882–1895
.
B. On réalise alors une analyse par "MALDI-TOF mass spectrometry"
de la protéine purifiée (M)
.
B
Abscisse : les ratios masse-charge des molécules-ions détectés.
Ordonnée : intensité du signal en index arbitraire.
Selon le pic [M+H]+ Ã 29771.96, on aurait
une protéine (M) de masse moléculaire :
29772-1 = 29771 Da puisque z=1 pour [M+H]+
Le pic [M+2H]2+ conduit lui à 14874,5*2-2 = 29747 Da
puisque z=2 et 2 protons dans la molécule-ion.
On retiendra une masse moléculaire vers 29,75 kDa
pour la protéine (cf. écart sur les calculs).
suivant
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Fin
Pic de la molécule-ion majoritaire formée par
la source d'ionisation MALDI :
[M+H]+
Pic de molécule-ion
moins fréquente :
[M+2H]2+
1
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