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Adapté de Raju, T. & Jordan, Robert. (2012). Galactosylation variations in marketed therapeutic antibodies. mAbs. 4. 385-91.
Une IgG humaine dirigée
contre l'Iinterleukine-12 est produite
en culture de cellules myélomateuses
de souris, lignée SP2/0 = Mab (pour
Mouse antibody).
L'IgG monoclonale ainsi produite
est purifiée = Mab non traitée.
Une fraction aliquote purifiée est
traitée à l'enzyme peptide-N-glycosidase F
(PNGase F) qui va déglycosyler
la protéine
= Mab déglycosylée.
On analyse les 2 fractions en MALDI-TOF MS.
Le contexte :
Retour Départ
Fin
A. Analyse de Mab non traitée.
[M+H]
[M+2H]
[M+3H]
+
2+
3+
[M+H]
+
: Mab à 148 700 Da
[M+2H]
2+
: Mab à 74374*2 - 2 = 148 746 Da
[M+3H]
3+
: Mab à 49609*3 - 3 = 148 824 Da
Donc on a Mab vers 148,7 kDa
B. Analyse de Mab traitée pour déglycosylation.
[M+H]
+
: Mab à 145 590 Da
[M+2H]
2+
: Mab à 72687*2 - 2 = 145 372Da
[M+3H]
3+
: Mab à 48466*3 - 3 = 145 395 Da
Donc on a Mab vers 145,5 kDa
[M+3H]
3+
[M+2H]
2+
[M+H]
+
Conclusion : les résidus de glycosylation de l'IgG Mab sont bien présents chez la protéine sécrétée
et ont une masse moléculaire globale vers 148,7 - 145,5 = 3,2 kDa par Mab.
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