image/svg+xml Adapté de Raju, T. & Jordan, Robert. (2012). Galactosylation variations in marketed therapeutic antibodies. mAbs. 4. 385-91. Une IgG humaine dirigée contre l'Iinterleukine-12 est produite en culture de cellules myélomateusesde souris, lignée SP2/0 = Mab (pour Mouse antibody).L'IgG monoclonale ainsi produiteest purifiée = Mab non traitée.Une fraction aliquote purifiée est traitée à l'enzyme peptide-N-glycosidase F (PNGase F) qui va déglycosyler la protéine = Mab déglycosylée.On analyse les 2 fractions en MALDI-TOF MS. Le contexte : Retour Départ Fin A. Analyse de Mab non traitée. [M+H] [M+2H] [M+3H] + 2+ 3+ [M+H] + : Mab à 148 700 Da [M+2H] 2+ : Mab à 74374*2 - 2 = 148 746 Da [M+3H] 3+ : Mab à 49609*3 - 3 = 148 824 Da Donc on a Mab vers 148,7 kDa B. Analyse de Mab traitée pour déglycosylation. [M+H] + : Mab à 145 590 Da [M+2H] 2+ : Mab à 72687*2 - 2 = 145 372Da [M+3H] 3+ : Mab à 48466*3 - 3 = 145 395 Da Donc on a Mab vers 145,5 kDa [M+3H] 3+ [M+2H] 2+ [M+H] + Conclusion : les résidus de glycosylation de l'IgG Mab sont bien présents chez la protéine sécrétée et ont une masse moléculaire globale vers 148,7 - 145,5 = 3,2 kDa par Mab. suivant
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