Première approche
Soit des solutions contenant un fluorochrome mesurées dans des conditions de rendement quantique constant. On mesure à λexc. donnée et λem. donnée.
• Soit Φi l'intensité du flux photonique d'excitation à λexc..
• Soit Φt l'intensité du flux photonique transmis (non absorbé) à λexc..
• Soit ε le coefficient d'absorbance moléculaire du fluorochrome étudié à λexc..
• Soit l l'épaisseur de cuve de mesure.
• Soit c la concentration en fluorochrome.
On a Φt = Φi * 10εlc (loi de Beer lambert).
Donc le flux absorbé est Φabs. = (Φi - Φt) = Φi - Φi * 10εlc = Φi (1 - 10εlc)
La fluorescence est mesurée à λem. donnée. Le rendement quantique est Y (rapport des photons émis aux photons absorbés) et les photons mesurés sont ceux de longueur λem. dont l'énergie est plus faible que celle des photons absorbés (λem. > λexc., soit k le rapport des énergies) et selon un angle qui fait qu'on ne mesure qu'une fraction f de la fluorescence.
On a donc fluorescence mesurée = Y*k*f*Φi (1 - 10εlc)
Soit fluorescence mesurée = coef. * (1 - 10εlc)
avec 0< Y <1 et 0< k <1 et 0< f <1
Si c est faible, le développement limité au premier ordre donne : fluorescence mesurée = coef.*(ln(10))*ε*l*c = K * c avec K coefficient qui sera évalué par étalonnage.
Et on complique
L'effet de filtre interne par l'épaisseur de l'échantillon mesuré !