Agrobacterium et plasmide Ti 1

Vecteurs de clonage végétaux et plasmide Ti

Le plasmide Ti est à la source de vecteurs de clonages pour les végétaux.

En effet le plasmide Ti présente des propriétés très intéressantes pour cette fonction :

C'est un plasmide (d'Agrobacterium) avec une origine de réplication (ori) ...
Associé à sa bactérie porteuse, il est naturellement transformant, vecteur d'expression, au niveau de la portion ADN-T qui sera intégrée définitivement, sans ré-arrangement, au génome végétal (et on peut bien évidemment faire disparaître la souche bactérienne infectante de départ, une fois les cellules transformées. La transformation est irréversible, stable, à génétique Mendélienne).

En bricolant un peu le plasmide Ti, en le désarmant, on construit de bons vecteurs de clonages végétaux médiés par Agrobacterium:

On élimine certaines séquences devenues inutiles pour l'objectif clonage
L'insert sera placé entre les 2 séquences bordantes qui définissent la région ADN-T
On pourra "monter" sur le vecteur différents systèmes de marquages : lac Z, luciférase ...

Voir un cours de génie génétique pour végétaux ...

Voici avec 2 images la présentation d'outils "binaires" (d'après http://plantcellbiology.masters.grkraj.org/html/Genetic_Engineering4D-Transformation-Plant_Cells.htm) :

Ci-dessus les "boites génétiques" d'un vecteur dérivé de Ti (appelé vecteur binaire) dans le cadre d'une stratégie avec plasmide "helper".

On le voit, le vecteur portant le(s) gène(s) d'intérêt à transférer est désarmé, il ne porte pas les gènes dits de virulence (ceux qui permettent le transfer intégratif de la région d'inétrêt entre LB et RB). C'est un plasmide "helper" qui va porter ces gènes "vir" qui va être utilisé conjointement (effet dit en "trans").

Voici un schéma tiré de "Lee LY, Gelvin SB. T-DNA binary vectors and systems. Plant Physiol. 2008;146(2):325–332" (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2245830/) :

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