3. Phage M13 et "phage display"

La technique de "phage display" (exposition sur phage, en français) est une technique qui permet de cribler une banque de protéines obtenue à partir d'une banque de séquences ADN quant à leur capacité à se lier à une cible donnée. Cette technique utilise très souvent des dérivés du phage m13.

Voici les temps de la technique :

1. Obtenir la banque de séquences qui coderont les protéines d'intérêts (POI). Par exemple une banque de séquences ADNc de domaines variables anticorps de lama (des anticorps qui présentent la particularité d'un domaine variable de reconnaissance monomérique).
2. Cloner la banque de séquences dans un vecteur qui permettra l'expression de protéines de fusion POI-protéine p3 du phage m13.
3. Co-transformer une souche E. coli avec la banque de vecteurs et un vecteur "helper" (qui apporte de quoi obtenir un cycle de multiplication de m13). On obtient ainsi une banque de phages M13 portant une protéine p3 fusionnée avec une POI.
4. Cribler la bibliothèque de phages à p3 fusionnée avec les POI quant par la capacité à se lier (être reconnus) par une cible donnée. Par exemple, la capacité à se lier à un antigène donné.
5. On peut alors multiplier les phages recombinés d'intérêt, refaire des criblages de plus en plus stringents ... Et on obtient ainsi les séquences des meilleurs protéines liant la cible choisie.

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