Western blot avec robots capillaires

En images.

sds page capillaire photoimmobilisation

Ce genre de robot permet aussi en général l'analyse du profil des protéines totales séparées par la SDS-PAGE capillaire. Par exemple, les protéines sont immobilisés à la paroi capillaire par la technique de photoimmobilisation aux haloalcanes. Après extrusion du gel et lavage, les protéines totales sont marquées à la biotine à l'aide d'un ester biotinylé activé réagissant avec les fonctions amines (donc les résidus lysines). Ceci permet alors la révélation des protéines totales biotinylées avec un conjugué streptavaidine-peroxidase et une réaction de chimiluminescence.

L'entreprise "ProteinSimple" commercialise les robots de Western blot les plus connus : "WESS" et "JES"... Question documentation ils sont très secrets, on ne les félicite pas ! https://proteinsimple.com/.

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Questionnaire de vérification de compréhension de la lecture de cette page

Dans le cadre des cours et du travail des cours en ligne pour les étudiants du BTS biotechnologies, lycée St Louis de Bordeaux, ce paragraphe apparaîtra corrigé le vendredi 20/03. Le questionnaire ci-dessous vise juste à vérifier une lecture en compréhension du schéma ci-dessus.

Question 1.

En SDS-PAGE Western-blot classique, une gel d'électrophorèse peut proposer de nombreuses pistes, chacune pour un échantillon. En Western blot avec robots capillaires, combien de pistes peut proposer un capillaire lors d'une analyse ?

Question 2.

Comment est réalisé l'équivalent du transfert d'un Western-blot classique ?

Question 3.

Quelle type de composition primaire de protéine la rendra non détectable par la chimie d'immobilisation proposée ?

Question 4.

On suppose un échantillon de type lysat cellulaire (donc contenant une image de toutes les protéines solubles cellulaires) dont on analyse 2 protéines grâce à 2 anticorps spécifiques, la protéine X, monomérique, de masse moléculaire 75000 kDa et la protéine de ménage GAPDH, homotétramérique, de masse moléculaire totale de 144 kDa. On suppose qu'on travaille avec une révélation en fluorescence (anticorps secondaires marqués par des fluorophores en fluorescence infra-rouge). Dessiner l'allure d'un électrophorégramme.

Voici le lien vers les réponses".

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