4. Saccharomyces cerevisiae sur milieu synthétique
YNBwo/aa + sulfate d'ammonium + glucose (SD)
Saccharomyces cerevisiae = levure de bière (une espèce chimiorganotrophe hétérotrophe nécessitant classiquement quelques coenzymes comme la biotine ou le
panthoténate (vitamines) comme facteurs de croissance). On suppose une souche sauvage
standard.
La composition du milieu synthétique proposé est la suivante :
- "yeast nitrogen base" sans aminoacides ni sulfate d'ammonium : 1,7 g/L
;
- sulfate d'ammonium : 5 g/L ;
- glucose 20g/L.
L'analyse demande de savoir la composition de "yeast nitrogen base" sans
aminoacides ni sulfate d'ammonium. Il s'agit d'une base synthétique très
classique dans les laboratoires travaillant avec des levures dont la
composition est la suivante :
Yeast Nitrogen Base (YNB) (sans aminoacides ni
sulfate d'ammonium) en g/L de milieu final
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cofacteurs organiques d'enzymes (vitamines), dénominations anglaises
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minéraux, dénominations anglaises
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Biotin 2 µg
Calcium pantothenate 400 µg
Folic acid 2 µg
Inositol 2000 µg
Niacin 400 µg
p-Aminobenzoic acid 200 µg
Pyridoxine hydrochloride 400 µg
Riboflavin 200 µg
Thiamine hydrochloride 400 µg
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Boric acid 500 µg
Copper sulfate 40 µg
Potassium iodide 100 µg
Ferric chloride 200 µg
Manganese sulfate 400 µg
Sodium molybdate 200 µg
Zinc sulfate 400 µg
Potassium phosphate monobasic 1 g
Magnesium sulfate 500 mg
Sodium chloride 100 mg
Calcium chloride 100 mg
|
Aspect énergétique :
- Le glucose est la source d'énergie primaire. Métabolisme énergétique
chimioorganotrophe.
Aspect constitutif :
- Carbone. A l'exception d'un apport en cofacteurs organiques d'enzymes à des concentrations
vitaminiques de l'ordre du µg, le glucose est la source unique de carbone.
Tous les squelettes carbonés des acides aminés, des nucléotides, des
lipides membranaires, des sucres de paroi ... ont le glucose pour origine !
La culture ne sera donc possible que si la souche peut synthétiser tous les
aminoacides, toutes les bases azotées ... à partir des métabolites
intermédiaires précurseurs fondamentaux obtenus à partir du glucose ! Un
mutant leucine- ou adénine- par exemple, ne pourra pas cultiver.
- Azote. Sous forme minérale NH4+ (qui est donc
assimilé).
- Soufre. Sous forme minérale SO42- (qui est donc
assimilé).
- Phosphore. Apport minéral sous forme phosphates.
- Macronutriments minéraux : apports en K+, Mg2+,
Ca2+, Na+, Cl-...
- Micronutriments minéraux : apports controlés en Mn2+,
Zn2+, Cu2+ ...
- De nombreux cofacteurs organiques d''enzymes sont apportés par le milieu. Avec le statut de
facteur de croissance pour ceux qui ne sont pas biosynthétisables par
Saccharomyces cer. et pour ceux là seulement. Evidemment, pour un cofacteur
que la levure peut biosynthétiser et présent dans le milieu, il sera
assimilé et utilisé tel que et la chaîne de biosynthèse sera réprimée.
Remarques.
Sur le milieu SD, on pourra cultiver un mutant auxotrophe adénine- en le
complémentant l'adénine. L'adénine aura le statut de facteur de croissance
pour ce type de mutant.
Sur le milieu SD, on pourra cultiver un mutant auxotrophe leucine- en le
complémentant en leucine. La leucine aura le statut de faccteur de croissance
pour ce type de mutant.
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