Protection de la (des) protéine(s) extraites

4.1 Stabilité conformationnelle

Si la protéine d'intérêt est peu thermostable, il pourra être nécessaire de travailler à 0-4°C.

L'ajout de ligands permet de stabiliser de nombreuses protéines. Certaines enzymes sont stabilisées par liaison de cations métalliques comme Mg2+...

4.2 Protéine sensible à l'oxydation

Les agents réducteurs comme le dithiothréitol ou le 2-mercaptoéthanol protègent les protéines sensibles à l'oxydation. En particulier les enzymes à -SH libre(s) accessible(s) susceptibles de s'oxider.

4.3 Protéases libérées lors de l'extraction

Les inhibiteurs de protéases sont des additifs souvent importants. En effet, l'étape de lyse libère en général des enzymes protéolytiques qui pourraient attaquer une fraction de la protéine d'intérêt. On peut éviter ce risque en travaillant à 0-4°C durant toutes les étapes où des protéases risquent encore d'être présentes ou par ajout d'inhibiteurs sélectifs des protéases.

Parmi ces inhibiteurs, il est simple de retenir le PMSF (substrat suicide des protéases à sérine) et les complexant comme l'EDTA (inhibiteur des métalloprotéases, protéases à Zn2+).

Voir un tableau complet à : http://www.embl.de/pepcore/pepcore_services/protein_purification/extraction_clarification/lysis_buffer_additives/index.html.

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