2. Dessalage, changement de tampon, concentration

A l'issue d'une précipitation au sulfate d'ammmonium, le milieu est évidemment très chargé en sulfate d'ammonium, ce qui peut être incompatible avec les étapes suivantes de purification. Il faut donc dessaler, changer de conditions de tampon. Et éventuellement en profiter pour concentrer. Différentes possibiltés :
- la dialyse et surtout son évolution moderne la diafiltration ;
- le dessalage par chromatographie d'exclusion-diffusion

A gauche un schéma de montage de diafiltration (ultrafiltration tangentielle destinée à changer le tammpon initial par le tampon "diafiltration buffer" et éventuellement à concentrer.
(Schéma retravaillé à partir d'un schéma de la documentation PALL, www.pall.com).

 precipitation_2_fig1 (38K)

Il existe des systèmes d'ultrafiltration frontale miniaturisée qui permettent de dessaler et de travailler sous de très petits volumes, pour les purifications à très petite échelle de laboratoire.

Dessalage par chromatographie d'exclusion-diffusion (gel filtration) : typiquement avec un volume de gel de 4 à 10 fois le volume échantillon et une colonne avec un ratio longueur/diamètre assez élevé pour qu'elle soit performante (par exemple >5). Il existe des systèmes miniaturisés de laboratoire avec centrifugation.

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